<var id="f1pdz"></var>
<cite id="f1pdz"></cite>
<var id="f1pdz"></var>
<cite id="f1pdz"></cite>
<cite id="f1pdz"></cite>
<cite id="f1pdz"></cite> <var id="f1pdz"><video id="f1pdz"></video></var>
<cite id="f1pdz"></cite><ins id="f1pdz"><span id="f1pdz"></span></ins>
<ins id="f1pdz"><noframes id="f1pdz"><cite id="f1pdz"></cite><ins id="f1pdz"><noframes id="f1pdz"><var id="f1pdz"></var>
<var id="f1pdz"><span id="f1pdz"></span></var>
<cite id="f1pdz"><span id="f1pdz"></span></cite>
<cite id="f1pdz"><span id="f1pdz"><var id="f1pdz"></var></span></cite>
浙江省科技型企業---加速您的多肽研究
首頁 >多肽服務 >肽核酸合成

多肽服務

肽核酸合成
  • 一、PNA簡介

    PNA(peptide nucleic acids, PNA)肽核酸技術,是90年代丹麥科學家發明的一類以多肽骨架取代糖磷酸主鏈的DNA類似物,即以中性的肽鏈酰胺2-氨基乙基甘氨酸鍵取代了DNA中的戊糖磷酸二酯鍵骨架,其余的與DNA相同,PNA可以通過Watson-Crick堿基配對的形式識別并結合DNA或RNA序列,形成穩定的雙螺旋結構。由于PNA沒有帶電荷的磷酸基團,因此不存在靜電排斥。這使得PNA跟DNA結合比DNA與DNA之間的結合更加牢固。PNA既不是多肽,也不是核酸,因此DNA酶跟蛋白酶都不能水解PNA,無論在體外或者體內,PNA都相當穩定。

    1、跟DNA、RNA相比,PNA 有2個最重要的特點是:

    1)跟對應的核酸結合,Tm 值高,穩定性強。

    2)跟對應核酸序列結合,特異性非常高:完全配對時,Tm值比對應的DNA-DNA高;如果有一個堿基不配對,Tm 值會下降15℃左右,比對應的DNA-DNA Tm 值低;如果有2個堿基不配對,完全不能結合。 基于以上不同于DNA、RNA 的特性,PNA 為生命科學的研究及藥物開發提供了新的思路。

     

    2、PNA特性&優勢

    強結合力:PNA是由電中性的酰胺骨架組成,因此PNA鏈與DNA鏈之間無排斥現象,因此,PNA與DNA之間具有更強的結合力。

    強特異性及靈敏性:在不存在錯配的情況下,PNA/DNA結合穩定性強于DNA/DNA;在錯配情況下,PNA/DNA結合穩定性弱于DNA/DNA。即便是單個堿基錯配,也會造成溶解曲線的巨大差異。因此,可以區分單個堿基的錯配。沒出現1個堿基的錯配,Tm值平均降低15°C,如果2個堿基錯配,則完全不能雜交,因此特異性極高。

    強穩定性:PNA具有較強的化學,生物學,熱力學穩定性。PNA在高溫,強PH條件下,均具有較強的穩定性。并且由于PNA骨架有別于核酸以及多肽骨架,因此,核酸酶及蛋白酶均不易降解PNA。

    強雜交穩定性:PNA在高鹽濃度的雜交液中具有較強的穩定性,以及結合力。因此,PNA可以作為比較穩定的雜交探針應用于科學研究。在相同條件下,15個相同序列的堿基,DNA/DNA的Tm值為53.3°C,DNA/RNA的Tm值為50.6°C,PNA/DNA的Tm值高達69.5°C,PNA/PNA更是高達72.3°C,即與相同序列的天然核酸堿基序列相比,每增加1個堿基,解鏈溫度提高1°C,大大提高了雜交穩定性。

    強安全性:PNA幾乎沒有毒性,為小鼠經脈注射PNA,2h后觀察PNA存在于所有的組織器官中,而90%的PNA在用藥后24 h內以未經修飾的形式經尿排出,因此PNA對于生物體來說,具有很高的安全性。

    二、PNA結構

    肽核酸PNA的結構(專肽生物www.cnjhd.com)

    三、PNA 設計及注意事項

    1. 結合特性。雖然從理論上講,PNA可以從兩個方向來和目的片段形成雜交體,但實際上,最常見的是反向結合( anti-parallel orientation)。PNA的N末端相當于寡核苷酸的5′端,因此也經常被稱為PNA的5′端。和普通的DNA/DNA雜交體相比較,PNA/DNA具有較高的Tm值。一般而言,在100mM NaCl的條件下,每個堿基對的Tm值會升高大約1°C。

    2. 長度。由于PNA具有很高的親和力(higheraffinity),因此不需要設計很長的序列,一般而言12-18個已經足以滿足需要,這和其他常規25-40個寡核苷酸探針有著巨大的區別。我們必須要記得,序列越短,則其特異性就越高。對PNA而言,有時更短的序列也會達到預期的效果。反而長的PNA會發生聚集沉淀(aggregate),而影響下游的純化和分析。

    3. 嘌呤含量。嘌呤含量高的PNA,特別是鳥嘌呤G,也容易發生聚集沉淀(aggregate)。所以,在任何10個連續的PNA單體中,不要有6個或者更多的嘌呤出現。因此,從這意義上講,越短的PNA序列,那么就越不需要擔心設計上出現問題。

    4. 自身互補。盡量來防止自身互補(Self-complementarity)的發生。在序列設計上,避免反向重復(inverserepeats),發夾結構(hairpinforming),和回文序列(palindromic sequences)。

    5. 改善溶解性。當 PNA 鏈較長(>22mer)或者嘌呤含量高(>60%) 時,為了提高 PNA 探針的溶解性,我們建議在序列中加入一些助溶基團如 O linker、E linker、X linker 或者兩個賴氨酸。當 PNA 偶聯多肽或染料時,接頭(linker) 可以起到空間間隔(spacer)的作用。

    6. 標記 PNA。 PNA 鏈 5′ 端和 3′ 端均可以標記。由于 3′ 端是非活性基團(-CONH2),所以需加入一個賴氨酸,其側鏈上的氨基可以用來標記。如果在 5′ 端標記,我們建議在 PNA 和標記物之間加 1~2 O linkers。標記物:熒光基團(—NHS 酯或羧基酰胺)、生物素等。

    四、PNA 的訂購

    PNA的價格取決于序列長度、產量和修飾標記,請聯系我們的銷售人員。

    最低訂購量: 未標記 PNA 50 nmole,標記PNA 25 nmole。

    提供PNA的純度大于>95%,HPLC 純度分析報告、質譜分析報告,一般3~4周交貨。